GM AAVパッケージングサービス
- 効率的で生産的 / 比類なき品質と生存率 / 多様なAAVベクターグレード / 迅速な対応、高純度、強化された活性、優れた安全性
GVC AAV生産サービス
AAVは、遺伝子治療および遺伝子編集タスクに安全で効率的なウイルスベクターとして知られています。ウイルスベクターは、in vivo遺伝子転送に特に適しています。AAV1.0、AAV2.0からAAV3.0の3世代のAAVの開発に伴い、異なる組織特異性を持つより多くの人工セロタイプが存在し、目的の臓器への特定のターゲティングが可能になっています。
GVC (GeneMedi Vector Core)には、研究から臨床までの様々なAAVベクターグレードがあり、科学および臨床研究の様々な用途に適した異なるレベルのAAVベクターを提供します。GVC AAVベクターの生産は、独自の最先端技術、柔軟でスムーズな生産ワークフロー、厳格な品質管理により効率的で生産的であり、高品質で完全に信頼できます。
GeneMedi GVCは、あなたのAAV生産およびAAVプロセス開発に理想的なパートナーとなるでしょう。
GVCサービスのAAVの種類
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複数のセロタイプ: AAV1, 2, 3b, 4, 5, 6, 7, 8, 9, PHP.eB, PHP.B, PHP.S, rh10, DJ, DJ/8, AAV2.7m8, AAV2-retro, AAV8-1m/2m/3m, AAV2(Y444F), AAV2, AAV6.2FF, AAV-i.e, AAV-BR1, AAV-2i8, AAV-SIG, AAV-VEC, AAV-Myo, Anc80など
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シングルストランドAAV（ssAAV）およびセルフコンプリメンタリーAAV（scAAV）
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プレメイドAAV粒子およびカスタマイズされたAAV生産
GVC AAV生産の安定性
図1: 高収量の一貫したAAV生産プラットフォーム
図2: 異なるAAVセロタイプの製造バッチ安定性
上流プロセスと下流プロセス
| 一時的なトリプルトランスフェクション | 研究グレード-パイロット | 研究グレード-標準 | GMP類似グレード/GMPグレード |
| 細胞タイプ | 接着 | 接着 | 懸濁 |
| 細胞バンク | —— | —— | TBD |
| 無血清 | N | N | Y |
| プラスミドバンク | N | N | Y |
| 精製 | 非精製 | CsCl密度勾配 | Clarification Tangential Flow Filtration Affinity chromatography Anion-Exchange (AEX) Chromatography |
| 規模範囲 | 1E+12 GC/~5E+13 GC | 5E+12 GC/~5E+14 GC | TBD |
分析開発および品質管理 (AD&QC)
- 一般検査（物理検査）
- 識別
- 内容および効力
- 純度
- セキュリティチェック
- 不純物
| QCプロジェクト | 研究グレード-標準 | GMP類似グレード/GMPグレード | ||
| 方法 | 結果 | 方法 | 結果 | |
| 外観、明瞭さ | 光検査 | 視覚検査 "浮遊物のない透明な溶液" |
外観、明瞭さ | 視覚検査 "浮遊物のない透明な溶液" |
| 目に見える異物 | —— | —— | 目に見える異物 | ランプ検査 |
| 不溶性粒子 | —— | —— | 不溶性粒子 | 光ブロッケージ法 |
| pH値 | —— | —— | pH値 | pHメーター製品固有 |
| 浸透圧 | —— | —— | 浸透圧 | 冷凍法補助剤固有 |
| 充填量 | —— | —— | 充填量 | 体積法-USP/ChP要件を満たす |
| QCプロジェクト | 研究グレード-標準 | GMP類似グレード/GMPグレード | ||
| 方法 | 結果 | 方法 | 結果 | |
| AAVゲノムシーケンス | —— | —— | 制限酵素マップ分析 | 結果は不一致 |
| —— | —— | ポリメラーゼ連鎖反応（PCR） | ||
| —— | —— | 逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR） | ||
| —— | —— | 核酸配列決定 | ||
| カプシッドタンパク質の識別 | SDS-PAGEとWestern blotを組み合わせてカプシッドタンパク質VP1/2/3を識別 | VP1: VP2: VP3=1: 1: 10 | SDS-PAGEとWestern blotを組み合わせてカプシッドタンパク質VP1/2/3を識別 | VP1: VP2: VP3=1: 1: 10 |
| 完全なウイルス粒子の識別 | —— | —— | 構造分析、粒子サイズ分布、電子顕微鏡下での屈折率分析 | 凝集体-TEM（負染色）≤10% |
| QCプロジェクト | 研究グレード-標準 | GMP類似グレード/GMPグレード | ||
| 方法 | 結果 | 方法 | 結果 | |
| ウイルス粒子力価（V.P.） | —— | —— | ELISA | 結果報告/~1E14 VP/ml |
| ゲノム力価（V.G.） | QPCR | Q-PCRで検出された力価はプロトコル量以上 | ddPCR | 報告された結果/~1-5E13 VG/mL |
| 総タンパク質 | —— | —— | BCA | 報告された結果 |
| タンパク質発現（細胞） | —— | —— | ELISA/FIX | TBD |
| 感染力価（I.P.） | —— | —— | TCID50 | 結果報告/1-5E11 TCID50/ml |
| 特定活動 | —— | —— | 特定活動=ゲノム力価/感染力価 | <100 |
| 効力 - ゲノム発現 | —— | —— | qPCR, ELISA, Western Blotに基づく細胞のin vitro mRNA発現またはタンパク質発現検出 | 効力内容UV 0.8-1.2 mg/mL |
| 効力-活動 | —— | —— | 生体機能アッセイ | In Vitro Potency-（1-15間）vg/細胞 |
| QCプロジェクト | 研究グレード-標準 | GMP類似グレード/GMPグレード | ||
| 方法 | 結果 | 方法 | 結果 | |
| カプシッドタンパク質の純度試験 | SDS-PAGE電気泳動と銀染色 | SDS-PAGE ≥95%、VP1: VP2: VP3=1:1:10、明らかな汚染物質は検出されず | SDS-PAGE電気泳動と銀染色 | SDS-PAGE ≥95%、VP1: VP2: VP3=1:1:10、明らかな汚染物質は検出されず |
| 空シェル率の検出 | —— | —— | ddPCR/ ELISA | 結果報告 |
| —— | —— | 透過型電子顕微鏡（TEM） | 結果報告 | |
| —— | —— | 分析超遠心機（AUC） | 結果報告 | |
| ゲノム凝集の検出 | —— | —— | サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（SEC-HPLC法） | 結果報告 |
| QCプロジェクト | 研究グレード-標準 | GMP類似グレード/GMPグレード | ||
| 方法 | 結果 | 方法 | 結果 | |
| 複製可能なアデノ随伴ウイルス（rcAAV）は、製品の安全性の重要な評価指標です。 | —— | —— | DNA免疫ブロッティング（サザンブロット）およびqPCR | qPCR陰性 |
| 無菌試験 | 膜ろ過 | 成長なし | 膜ろ過 | 成長なし |
| 細菌内毒素試験 | リムルス試薬 | TBD | リムルス試薬 | LAL試験<10 EU/ml |
| マイコプラズマ | 培養法およびPCR法 | TBD | 培養法およびPCR法 | 陰性 |
| 外因性因子 | —— | —— | 培養 | 陰性 |
| 生物負荷 | —— | —— | 培養 | 結果報告 |
| 異常毒性検査 | —— | —— | 動物実験 | ChP要件を満たす |
| QCプロジェクト | 研究グレード-標準 | GMP類似グレード/GMPグレード | ||
| 方法 | 結果 | 方法 | 結果 | |
| ヘルパーDNAプラスミドの残留物 | —— | —— | ddPCR/qPCR | ≤50ng/ml |
| 宿主細胞DNAの残留物 | —— | —— | ddPCR/qPCR | ≤50 ng/ml |
| 残留E1A/E1B DNA（コピー/ドーズ） | —— | —— | ddPCR/qPCR | ≤(5-10) x 10^4コピー/mL E1A; (5-10) x 10^4コピー/mL E1B |
| 宿主細胞タンパク質の残留物 | —— | —— | ELISA | ≤0.5ug/10E^12/ml |
| ウシ血清アルブミンの残留物 | —— | —— | ELISA | ≤50ng/ml |
| 残留ベンゾネース | —— | —— | ELISA | ≤10 ng/ml |
| 特定プロセスに関連する残留物（例：ヨードキサノール、トランスフェクション試薬、アフィニティリガンド、ツイン20、洗剤トリトンX100など） | —— | —— | HPLC | 結果報告 |
AAV生産ワークフロー
GVCについて
GVC（GM Vector Core）は、GeneMediの独自のQbDウイルスベクター開発および製造プラットフォームです。GVCでは、アデノ随伴ウイルス（AAV）、レンチウイルス、アデノウイルス、およびVLPを含むウイルスベクターのカスタム生産が専門です。
最先端の施設は、研究および治療ニーズを満たす高品質なウイルスベクター生産を保証するために拡張可能な製造に対応しています。専門チームは、革新的な技術と広範な業界知識を活用して、期待を超えるカスタムソリューションを提供します。
GVCは、信頼性が高く効率的なウイルスベクター生産サービスを求める科学者および医療専門家にとって理想的なパートナーとなるでしょう。
AAVのアフィニティ精製効率
図3. AAV5アフィニティ精製：AAVアフィニティクロマトグラフィーのカラム効率は非常に良好です。
図4. 銀染色：AAV5/AAV8/AAV2アフィニティクロマトグラフィー後の純度は高いです。
表1: ddPCRによるThermo Scientific™ POROS™ CaptureSelect AAVXとの力価比較: AAVアフィニティクロマトグラフィーの回収率は同等です。
AAV効能の強化
図5. AAV効能。WB結果は、過剰発現したウイルスがタンパク質含量を著しく増加させることができることを示しています
図6. さまざまなAAVセロタイプに基づくマウスの筋肉および肺組織におけるEGFP発現
ケーススタディ1: マウス海馬におけるAAV媒介UROC1-RNAi
革新的な研究において、GeneMediのAAVベクターがマウス海馬にUROC1-RNAiを届けるために使用され、我々の製品が神経科学研究の進歩において重要な役割を果たしていることを示しています。この応用は、特定の脳領域をターゲットにするAAVベクターの精度と効率を強調し、神経学的状態を研究および治療するための新しい道を開きます。
図6. AAVセロタイプの筋肉内注射後の蛍光レベル（4週間）。RC1、RC5、RC6、およびPHP。s感染が最も優れており、組織内に蛍光が見られます; DJ、PHP蛍光顕微鏡Bの下でより明るくなります; その他のセロタイプはさまざまな程度の感染効果を示しますが、前述の6つよりもはるかに弱いです。
ケーススタディ2: 心臓特異的AAV発現ベクターの開発
我々のAAVカセット最適化能力は、心臓特異的発現ベクターの開発を通じて示されており、遺伝子治療に対するカスタムアプローチを強調しています。この成果は、治療の成功と特異性に重要な、ターゲット組織での遺伝子発現を正確に制御するプロモーター最適化における我々の専門知識を裏付けています。
ケーススタディ3: G-Next™からのエンジニアリングされたAAVベクターの優れた組織特異性
GeneMediのG-Next™プラットフォームからのエンジニアリングされたAAVベクターは、優れた組織特異性を示しており、ベクターデザインにおける我々の革新性を示しています。この進展は、特定の組織への遺伝子導入の精度を高め、非標的効果を減少させ、遺伝子治療の治療可能性を高めます。革新と品質への我々のコミットメントは、GeneMediを遺伝子治療分野のリーダーとして位置付け、個別化医療の可能性を推進します。
引用と出版物
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